江西外泌體iTRAQ

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）：將其中一種針對(duì)外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測(cè)固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，甚至可以進(jìn)行定量。但是，此方法需要通過(guò)超速離心或超濾對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣，流場(chǎng)-流分離與紫外線(xiàn)分析儀和光散射檢測(cè)器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類(lèi)，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。江西外泌體iTRAQ

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應(yīng)方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報(bào)道，并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復(fù)雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預(yù)后方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對(duì)診療的反應(yīng)也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定的。鼻腔灌洗液外泌體質(zhì)譜細(xì)胞分泌到細(xì)胞外環(huán)境中分別稱(chēng)為外泌體和微泡的細(xì)胞外膜泡。

外泌體的組成較為復(fù)雜，其內(nèi)含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán)，而后被靶細(xì)胞吸收，從而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞基因表達(dá)和細(xì)胞功能。此外，外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調(diào)節(jié)致病基因或抑病基因的表達(dá)，參與細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)。有研究表明，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強(qiáng)種瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力、介導(dǎo)種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)展。

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運(yùn)輸。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分離出來(lái)的外泌體含有中流細(xì)胞特異性的mRNA，而被愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(EBV)感ran的細(xì)胞分泌的外泌體中也含有EBV的潛伏期mRNA。因而，外泌體的這種運(yùn)載mRNA的能力引起了中流研究者們的注意。近期，Saydam等率先報(bào)道了利用多泡體(含外泌體)負(fù)載mRNA/蛋白進(jìn)行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對(duì)HEK-293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶;EGFP:增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處，并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神經(jīng)鞘瘤的增長(zhǎng)被明顯抑制。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。

外泌體的來(lái)源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類(lèi)型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿ΑＭ饷隗w普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。江西外泌體iTRAQ

外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。江西外泌體iTRAQ

利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個(gè)重要方法，不過(guò)目前抗ai癥藥物的運(yùn)載存在著種種挑戰(zhàn)，主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn):(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu，體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運(yùn)輸抗ai癥藥物，可以提高藥物體系的水溶性，降低藥物對(duì)人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長(zhǎng)其循環(huán)時(shí)間。近期，兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中，并對(duì)其抗中流作用進(jìn)行了研究。江西外泌體iTRAQ

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